A DE-KK Laboratóriumi Medicina Intézetének Hemosztázis és Laboratóriumi Immunológiai Részlegei harmonizálják az antifoszfolipid szindróma laboratóriumi diagnosztikáját így 2015. július 13-tól új módszerek és algoritmus alapján történik az antifoszfolipid antitestek kimutatása.

A Laboratóriumi Medicina Intézet Hemosztázis Részlegén több mint 15 éve végezzük az antifoszfolipid antitestek meghatározását és a lupus anticoagulans detektálását. Előbbiekre az Inova cég reagenseit használjuk és közvetlenül anti-kardiolipin (anti-CL) IgG és IgM valamint anti-β2-glikoprotein I (anti-β2GPI) IgG és IgM kimutatása történik. Az LMI-hez nemrégiben csatlakozott Laboratóriumi Immunológiai Részleg több mint 15 éve végez anti-PL antitest diagnosztikát az Orgentec cég reagenseinek segítségével. Itt első lépésben anti-CL és anti-β2GPI szűrőteszt történik, ami mind az IgG, IgM és IgA izotípusú anti-PL antitesteket detektálja. Amennyiben a szűrőteszt negatív, a kiadott eredmény valamennyi izotípusú anti-PL antitestre negatív lesz. Ha a szűrőteszt pozitív, akkor külön-külön kvantitálásra kerülnek az anti-β2GPI IgG, IgM és IgA antitestek, míg az anti-CL antitestek esetén az IgG és IgM alosztályok kibontása történik meg, és az egyedi eredmények kerülnek kiadásra.
Miután a két Részlegen ugyanazok a vizsgálatok különböző platformon és eltérő algoritmus alapján történnek feltétlenül szükségesnek éreztük ezek harmonizálását. Ezen folyamat során figyelembe vettük a thrombophilia, a primer anti-foszfolipid szindróma (APS) és az autoimmun betegségek (elsősorban Systemas Lupus Erythematosus – SLE) diagnosztikáját leíró nemzetközi ajánlásokat és financiális szempontokat is.

A thrombophilia kivizsgálás esetében az International Society on Thrombosis and Haemostasis társaság guidelinejai1,2 a lupus antikoagulans (LA) funkcionális tesztelése mellett az IgG és IgM izotípusú anti-CL és anti-β2GPI antitestek meghatározását javasolják immunno-assay segítségével. Az SLE SLICC 2012-es ajánlása3, az SLE diagnosztikájában a fentiek mellet az IgA izotípusú anti-CL és a anti-β2GPI antitestek mérését is tartalmazza. Mindezek alapján – az eddigi vizsgálatkérési szokásokat is figyelembe véve – az anti-PL antitestek meghatározásának új algoritmusa a következőképpen alakul:

1., Amennyiben a thrombosis hajlam megítélése érdekében a thrombophilia kivizsgálás protokollja szerint lupus antikoagulans és anti-PL antitestek detektálását is kéri a beküldő, akkor 2 cső citrátos mintára van szükség a meghatározáshoz. Ebből a plazma mintából történik meg először az LA meghatározás, majd ezt anti-CL és anti-β2GPI szűrőteszt követi, ami mind az IgG, IgM és IgA izotípusú anti-PL antitesteket detektálja. Amennyiben a szűrőteszt negatív, a kiadott eredmény valamennyi izotípusú anti-PL antitestre negatív lesz. Ha a szűrőteszt pozitív, akkor külön-külön kvantitálásra kerülnek az anti-CL IgG és IgM illetve az anti-β2GPI IgG és IgM antitestek. Amennyiben az IgG és/vagy IgM eredmények pozitívak az egyedi eredmények kiadásra kerülnek és nem történik anti-CL és anti-β2GPI IgA antitest meghatározás. Ha az IgG és IgM eredmények negatívak akkor az IgA izotípusú anti-PL antitestek tesztelését is elvégezzük és az összes egyedi IgG, IgM és IgA eredmény kiadásra kerül.

2., Amennyiben a beküldő nem kér LA meghatározást, csak az anti-PL antitestek mérését akkor 1 cső natív mintára van szükségünk a vizsgálathoz. Ebből a szérum mintából végezzük az anti-CL és anti-β2GPI szűrőteszteket, majd az algoritmus az 1. pontban leírtaknak megfelelően folytatódik.

A meghatározás elve:

A szűrőtesztek mind az IgG, IgM és IgA típusú anti-PL antitestek kimutatására alkalmas ELISA-k. Pozitív szűrőteszt esetében az IgG, IgM és IgA izotípusú anti-PL antitestek specifikus kimutatása lumineszcens immunoassay-vel történik.

Az eredmény értékelése:

A vizsgálat eredményeként a következő paramétereket adjuk meg.

• 1., Anti-CL szűrőteszt: <1,0 érték negatív, ≧1,0 érték pozitív
• 2., Anti-β2GPI szűrőteszt: <1,0 érték negatív, ≧1,0 érték pozitív
• 3., Anti-CL IgG, IgM, IgA egyedi meghatározás: ≦20,0 érték negatív, >20,0 érték pozitív
• 4., Anti-β2GPI IgG, IgM, IgA egyedi meghatározás: ≦20,0 érték negatív, >20,0 érték pozitív

A módszerváltás miatt a pozitív mintákban a korábban kiadott numerikus értékekhez viszonyítva jelentős változás (növekedés) várható, amit a betegek követése során figyelembe kell venni.

Vizsgálatkérés, mintatípus, eredmények közlése

Amennyiben LA meghatározással együtt kérik az anti-PL antitest diagnosztikát a MEDSOL „KIZHEMOS” kérőlapján az “Antifoszfolipid szindróma kivizsgálása”, vagy a thrombophilia egyéb kockázati tényezőivel együtt „Thrombophilia panel” elnevezés kijelölésével rendelhető meg a vizsgálat, amihez ekkor 2 cső citráttal alvadásgátolt perifériás vér szükséges. Amennyiben LA meghatározás nélkül kérik az anti-PL antitestek meghatározását akkor ez a MEDSOL „KIZIML” kérőlapján az “APS-I” elnevezés kijelölésével rendelhető meg, amihez ekkor 1 cső natív vérminta szükséges.
Az „Antifoszfolipid antitestek II.” panel (anti-protrombin IgA/IgG/IgM, anti-foszfatidil-szerin IgG/IgM) és az „Antifoszfolipid antitestek III.” panel (anti-annexin V IgG/IgM) változatlanul “KIZIML”, illetve a „KIZTB” kérőlapokon találhatóak, és a meghatározás szérummintából történik.

A vizsgálattal kapcsolatban felmerülő kérdések esetén kérjük forduljanak Dr. Antal-Szalmás Péterhez és Dr. Bereczky Zsuzsannához, a Laboratóriumi Immunológia és a Hemosztázis részleg vezetőihez (50052 vagy 55291-es illetve 55944 és 55158 mellékek).
Eredményeket háromhetente egyszer adunk ki. Az anti-CL és anti-β2GPI antitest szűrések pontértéke 1779-1779 pont. Amennyiben a szűrőteszt pozitív és az egyedi antitestek is meghatározásra kerülnek akkor ennek pluszköltsége az anti-CL antitestek esetében izotípusonként 448 pont, míg az anti-β2GPI antitestek esetében izotípusonként 859 pont.

Irodalomjegyzék:

• Pengo V, Tripodi A, Reber G, Rand JH, Ortel TL, Galli M, De Groot PG; Subcommittee on Lupus Anticoagulant/Antiphospholipid Antibody of the Scientific and Standardisation Committee of the International Society on Thrombosis and Haemostasis. Update of the guidelines for lupus anticoagulant detection. Subcommittee on Lupus Anticoagulant/Antiphospholipid Antibody of the Scientific and Standardisation Committee of the International Society on Thrombosis and Haemostasis.J Thromb Haemost. 2009 Oct;7(10):1737-40.
• Pengo V, Banzato A, Denas G, Jose SP, Bison E, Hoxha A, Ruffatti A. Correct laboratory approach to APS diagnosis and monitoring. Autoimmun Rev. 2013 Jun;12(8):832-4.
• Petri M et al. Derivation and Validation of Systemic Lupus International Collaborating Clinics Classification Criteria for Systemic Lupus Erythematosus. Arthritis Rheum. 2012 August ; 64(8): 2677–2686.

Debrecen, 2015. július 06.

Tisztelettel:
Dr. Kappelmayer János s.k.
egyetemi tanár
a Laboratóriumi Medicina Intézet
igazgatója